細胞材料開発室　-CELL BANK-

凍結保存後のアンプルを融解し、再培養時の生存率を、 トリパンブルー染色法にて測定しています。
また、付着細胞では、一晩培養後の付着率も測定しています。

1. 準備するもの
・検査対象：凍結細胞
・培地
・遠心チューブ
・培養器具一式
・トリパンブルー染色液
・血球計算盤

2. 方法

(1)　培地5mlを入れた遠心チューブを準備する。
(2)　凍結細胞を、37℃の温水で振りながら、素早く融解する。
(3)　細胞懸濁液を軽くピペッティングし、予め培地を入れた遠心チューブに加える。
(4)　1000rpm、 3分(室温）で遠心し、上清を捨てる。（x2回）
(5)　ペレットに培地5mlを加えて懸濁する。
(6)　細胞を播種する。（右図参照）
(7)　生存率を測定する。

生存率（％）＝ Ｂ×５／Ａ ×100

残った細胞懸濁液をトリパンブルーで染色し、生存細胞数をカウントする。

A（cells/tube）=　凍結アンプル1本あたりの凍結生細胞数
　　　　　　　　　　（細胞材料発送時、同梱するデーターシート参照）
B（cells/ml）=　細胞懸濁液1ml中の生存細胞数、とする。

(8)　翌日、付着率を測定する。（付着細胞の場合）

付着率（％）＝ C／B ×100

Φ35mm dish 4枚中、2枚を剥がし、トリパンブルーで染色し、各dishの生存細胞数をカウントする。
C（cells/Φ35mm dish）=　カウントした2枚の生存細胞数の平均値、とする。