細胞をカウントする際に、トリパンブルー染色を行います。
トリパンブルーは、死細胞では細胞膜を透過し、細胞質を青く染色するため、細胞の生死判定が可能です。
1. 準備するもの
- 対象：細胞
- 培養器具一式
- 0.3～0.5％トリパンブルー染色液
- 血球計算盤（または自動セルカウンター）
2. 方法
- 細胞懸濁液とトリパンブルー染色液を１：１で混和する。
- 血球計算盤、または自動セルカウンターにより細胞数を測定する。
※トリパンブルー染色液と混和したまま放置すると、死細胞の割合が増えるため、速やかにカウントすること
3. 結果の判定
死細胞では細胞膜が壊れている為、青く染色されます。
染色されていないものが生細胞です。
白い丸形；生細胞 赤丸囲み；死細胞
【血球計算盤： タタイ式血球計算盤の場合】
この計算盤は大きく4ブロックに分かれており、1ブロックが8個の小ブロックに、さらに25マスに分かれている。一番小さいマスの大きさは(1/4)x（1/4）x（2/10）mmであるので（細胞数/マスx8x10＾4）で1ml中の値となる。また、全体を数えて100倍にしても1ml中の値となる。また、1ブロック当たり100個以上数え、4ブロックの平均値を求める。4ブックの値が±10％以内でない場合はサンプリングをしなおす。
- 血球計算盤及びカバーガラスの両面は70％エタノールを適量吹き付けたキムワイプで拭き（※ガラス面を傷つけないようにする）、両方を合わせて止め金をきちんと掛ける。
- パスツール等でピペッティングし、細胞浮遊液を均一にし、少量を取り、計算室に入れる。
- 顕微鏡にセットし、細胞をカウントする。
境界線上にある細胞は重複を避けるために、4辺のうち2辺をカウントする。（下図参照） - 正確な値を出す時は、2度サンプリングをし、平均値を求める。
注）他社製品をご使用の場合は、取り扱い説明書をご確認下さい。
○カウントする ●カウントしない
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