細胞材料開発室　-CELL BANK-

【付着細胞】

1. 準備するもの

• 対象：細胞
• 培地
• PBS（-）
• トリプシン等
• 培養容器・培養器具・機器等

2. 継代操作

1. 培地・PBS（-）を室温に戻す。
2. 顕微鏡観察により、細胞が80～90％程度のコンフルエントであることを確認する。
3. 細胞表面を傷つけないように容器を傾けながら古い培地を除き、PBS（-）を培養容器の壁に沿って静かに入れ、容器をゆっくり2～3回傾けて細胞表面を洗ったあとPBS（-）を除く。（ｘ2）
   　　注）培地やPBS（-）を除いた際に細胞表面が乾いてしまうと、細胞が死んでしまうので注意する。
4. トリプシン等を適量添加し、容器を傾けるなどして、細胞全体に行きわたらせた後、インキュベートする。
   　　（60mmdishの場合は0.5ml程度）
5. 顕微鏡で細胞が丸くなり剥がれ始めたのを確認する。
   　　注）トリプシン処理の時間が長すぎると細胞の生存に影響する。
6. 血清入り培地等を加えトリプシンの活性を止め、穏やかにピペッティングを行い、細胞を培養容器から剥がすと同時に細胞を分散させる。Trypsin-EDTA（※）使用時は遠心してTrypsin-EDTAを取り除く。
   　　（※）細胞を全て回収して遠心後（1000rpmｘ3～5min 室温）、上清を捨て、新しい培地で細胞を再懸濁する。
7. 新しい培養容器に培地を入れ、細胞懸濁液を播種する。（継代密度はデータシート参照）
   　　継代密度は細胞の状態によって調整する。
8. 培養容器を軽く揺すり、細胞を均一にする。
9. 顕微鏡で細胞を確認する。
10. インキュベーターに入れる。（温度はデータシート参照）

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6.継代操作（付着細胞）[1]-[4]	7.培地交換（付着細胞）

【浮遊細胞】

1. 準備するもの

• 対象：細胞
• 培地
• 培養容器・培養器具・機器等

2. 継代操作

1. 培地を室温に戻す。
2. 顕微鏡観察により、細胞が80～90％程度のコンフルエントであることを確認する。
   　 ＜コンフルエントの見極め方＞
   　・目安としては培地がやや黄色くなる。
   　・下の写真参照。

3. 培養液を穏やかにピペッティングし、細胞を分散させる。
4. 新しい培養容器に培地を入れ、細胞懸濁液を播種する。（継代密度はデータシート参照）
5. 培養容器を軽く揺すり、細胞を均一にする。
6. 顕微鏡で細胞を確認する。
7. インキュベーターに入れる。（温度はデータシート参照）

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8.継代操作（浮遊細胞）[1]-[3]	9.培地交換（浮遊細胞）[1]-[2]